DNA甲基化是一種表觀遺傳修飾，它是由DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNA methyl-transferase, Dnmt）催化S-腺苷甲硫氨酸作為甲基供體，將胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?-甲基胞嘧啶（mC）的一種反應(yīng)，在真核生物DNA中，5-甲基胞嘧啶是唯一存在的化學(xué)性修飾堿基。CG二核苷酸是最主要的甲基化位點(diǎn)，它在基因組中呈不均勻分布，存在高甲基化、低甲基化和非甲基化的區(qū)域，在哺乳動(dòng)物中mC約占C總量的2－7％。一般說來，DNA的甲基化會(huì)抑制基因的表達(dá)。DNA的甲基化對(duì)維持染色體的結(jié)構(gòu)、X染色體的失活、基因印記和腫瘤的發(fā)生發(fā)展都起重要的作用。
BSP法原理：用亞硫酸氫鈉修飾處理基因組DNA，所有未發(fā)生甲基化的胞嘧啶（C）被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶（U）而甲基化的胞嘧啶則不變?；蚪MDNA經(jīng)亞硫酸鹽處理后，設(shè)計(jì)BSP引物擴(kuò)增目的片段，此時(shí)尿嘧啶（U）全部轉(zhuǎn)化為胸腺嘧啶（T），最后對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序就可以判斷CpG位點(diǎn)是否發(fā)生甲基化。
服務(wù)價(jià)格
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服務(wù)編號(hào)
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服務(wù)內(nèi)容
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價(jià)格
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周期
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CWS024
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PCR產(chǎn)物直接測(cè)序
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￥1198/樣品
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1周
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服務(wù)內(nèi)容
1. 基因組DNA的Bisulfite轉(zhuǎn)化。
2. BSP（Bisulfite Sequencing PCR）法，PCR產(chǎn)物直接測(cè)序，包括引物設(shè)計(jì)，不包括合成。
樣品要求
·若提供基因組DNA，需≥2ug。
·若提供的材料為新鮮組織、血液、細(xì)胞等生物材料，請(qǐng)?zhí)峁┳銐蛱崛?ug以上基因DNA的材料量。
·基于所選擇的DNA甲基化檢測(cè)方法，請(qǐng)?zhí)峁┫鄳?yīng)的引物或引物序列。
終產(chǎn)品
·Bisulfite處理的基因組DNA；
·實(shí)驗(yàn)報(bào)告(包括BSP產(chǎn)物的直接測(cè)序報(bào)告)。
服務(wù)說明
·在基于Bisulfite 轉(zhuǎn)化的DNA甲基化檢測(cè)的方法中，引物是決定實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵因素，且視期望檢測(cè)的目的基因片段的不同，適宜引物的存在與否有較大的不確定性，請(qǐng)盡量采用其可行性經(jīng)過驗(yàn)證的引物，如因引物等非本公司原因?qū)е履硨?shí)驗(yàn)步驟失敗，使服務(wù)提前終止，已啟動(dòng)的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目正常收費(fèi)。若需DNA甲基化檢測(cè)用引物設(shè)計(jì)服務(wù)，價(jià)格另議。
·視BSP產(chǎn)物序列的不同，采用直接檢測(cè)有可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性降低；視BSP引物特異性的不同，BSP產(chǎn)物的克隆測(cè)序存在插入片段與目的片段不符合的可能性，建議選擇同時(shí)對(duì)多個(gè)克?。?gt;15個(gè)）進(jìn)行測(cè)序，以獲得足夠的數(shù)據(jù)用于后期分析，最后提供客戶5個(gè)有效克隆測(cè)序結(jié)果。
